技術(shù)簡(jiǎn)介

      原位雜交技術(shù)（In situ hybridization，ISH）是利用核酸分子單鏈之間有互補(bǔ)的堿基序列，將有放射性或帶熒光等標(biāo)記的外源核酸（即探針）與組織、細(xì)胞或染色體上待測(cè)DNA或RNA互補(bǔ)配對(duì)，結(jié)合成專一的核酸雜交分子，再以放射自顯影或免疫細(xì)胞化學(xué)方法對(duì)標(biāo)記探針進(jìn)行探測(cè)，將待測(cè)核酸在組織、細(xì)胞或染色體上的位置顯示出來(lái)。

      這一技術(shù)不需要從組織細(xì)胞中提取核酸，對(duì)組織中含量極低的靶序列有很高的靈敏度，并可保持組織與細(xì)胞的結(jié)構(gòu)完整，反映特異核酸分子的定位。特別是配合使用能定位特異蛋白分子的免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)，就能對(duì)生理或病理?xiàng)l件下從DNA到mRNA到蛋白質(zhì)這樣一個(gè)基因表達(dá)過(guò)程進(jìn)行定性和定位的分析，是基因表達(dá)研究強(qiáng)有力的手段。

      地高辛（Digoxigenin 簡(jiǎn)寫(xiě)Dig-）又稱異羥基洋地黃毒甙配基，這種類固醇半抗原僅限于洋地黃類植物，其抗體與其它任何固醇類似物如人體中的性激素等無(wú)交叉反應(yīng)。近年來(lái)，地高辛（Digoxigonin）標(biāo)記技術(shù)引起科技工作者的極大興趣。1987年，地高辛標(biāo)記的有關(guān)試劑及藥盒投放市場(chǎng)。地高辛標(biāo)記法顯示的顏色為紫藍(lán)色（標(biāo)記堿性磷酸酶-抗堿性磷酸酶顯色系統(tǒng)），有較好的反差背景。

      地高辛較放射性標(biāo)記系統(tǒng)安全，方便、省時(shí)間。同時(shí)在敏感性和質(zhì)量控制方面比生物素標(biāo)記技術(shù)要優(yōu)越，可以檢測(cè)出人基因組DNA中的單拷貝基因，是目前應(yīng)用最廣泛的非放射性標(biāo)記探針。采用的方法是利用末端轉(zhuǎn)移酶在單鏈3′-羥基端直接添加DIG-11-dUTP ，從而使地高辛摻入到序列末端,達(dá)到標(biāo)記的目的。地高辛標(biāo)記的 cDNA、RNA和寡核苷酸探針，不但探針的具有生物素標(biāo)記優(yōu)點(diǎn)，還克服了生物素標(biāo)記的探針在原位雜交過(guò)程中受組織內(nèi)源性生物素干憂等缺點(diǎn)，其應(yīng)用越來(lái)越廣泛。

      本公司進(jìn)行的RNA原位雜交主要是利用地高辛標(biāo)記的反義RNA為探針，與切片雜交，從而原位的顯示RNA的表達(dá)部位和相對(duì)豐度。

      原位雜交能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究而不受同一組織中其它成分的影響，因此對(duì)于那些細(xì)胞數(shù)量少且散在于其他組織中的細(xì)胞內(nèi)DNA或RNA研究更為方便；由于原位雜交不需要從組織中提取核酸，對(duì)于組織中含量極低的靶序列有極高的敏感性，并可完整地保持組織與細(xì)胞的形態(tài)，更能準(zhǔn)確地反映出組織細(xì)胞的相互關(guān)系及功能狀態(tài)。

服務(wù)內(nèi)容

注：

1. 組織取材應(yīng)盡可能新鮮。由于組織RNA降解較快，所以新鮮組織和培養(yǎng)細(xì)胞最好在30 min 內(nèi)固定。

2. 固定時(shí)間越長(zhǎng)，mRNA破壞的越多；做原位雜交組織固定時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，一般24h。

3. 在整個(gè)雜交前處理過(guò)程都需戴消毒手套，避免RNA污染。

4. 每個(gè)樣本先做2-3張預(yù)實(shí)驗(yàn)片。

服務(wù)流程

樣品與實(shí)驗(yàn)結(jié)果

實(shí)驗(yàn)結(jié)果示例