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基本信息

質(zhì)粒圖譜和多克隆位點信息

注意：

客戶在我公司選擇構(gòu)建載體服務(wù)項目時，請自行提供母源載體。

如要使用本公司保存的母源載體時，本公司不能保證所有母源載體完全符合客戶預(yù)期，也不承擔(dān)由此產(chǎn)生的任何責(zé)任。

載體描述

      質(zhì)粒是目前應(yīng)用最廣泛的Red同源重組質(zhì)粒，該質(zhì)粒含有受阿拉伯糖啟動子調(diào)控的exo、bet、gam基因，其復(fù)制子為低拷貝溫敏型復(fù)制子，便于質(zhì)粒的消除。
與同源重組基因敲除相關(guān)的3個酶：
      1、Exo蛋白：Exo蛋白是一種核酸外切酶，單亞基的分子量為24 kD，Exo蛋白的活性形式是一種環(huán)狀三聚物分子，中間有一中空的通道，通道的一端可容納雙鏈DNA分子，另一端只可容納單鏈DNA。Exo蛋白可結(jié)合在雙鏈DNA的末端，從DNA雙鏈的5’端向3’端降解DNA，使DNA分子形成3’粘性末端。
      2、Beta蛋白：Beta蛋白在Red同源重組中起著決定性作用，具有介導(dǎo)互補單鏈DNA退火的功能，是一種退火蛋白，單亞基的分子量為25.8 kD。在溶液中，Beta蛋白自發(fā)地形成環(huán)狀結(jié)構(gòu)，緊緊地結(jié)合在單鏈DNA的3’突出端，防止DNA被單鏈核酸酶降解，并介導(dǎo)互補單鏈DNA的退火。雙鏈DNA退火完成后，Beta蛋白從DNA雙鏈上解離下來。
      3、Gam蛋白：Gam蛋白為16kD的多肽分子，可與RecBCD核酸外切酶結(jié)合，抑制其對外源DNA的降解作用，防止外源DNA進入細胞后被宿主降解。

      pKD46含有溫度敏感型的復(fù)制起點oriR101，在３０℃培養(yǎng)時可以正常復(fù)制，而高于３７℃時會自動丟失。在pKD46上還含有受araB啟動子調(diào)控的exo, bet, gam基因，它們通過Ｌ-阿拉伯糖誘導(dǎo)表達，并攜帶氨芐青霉素抗性基因作為篩選標記

載體序列CATCGATTTATTATGACAACTTGACGGCTACATCATTCACTTTTTCTTCACAACCGGCACGGAACTCGCTCGGGCTGGCCCCGGTGCATTTTTTAAATACCCGCGAGAAATAGAGTTGATCGTCAAAACCAACATTGCGACCGACGGTGGCGATAGGCATCCGGGTGGTGCTCAAAAGCAGCTTCGCCTGGCTGATACGTTGGTCCTCGCGCCAGCTTAAGACGCTAATCCCTAACTGCTGGCGGAAAAGATGTGACAGACGCGACGGCGACAAGCAAACATGCTGTGCGACGCTGGCGATATCAAAATTGCTGTCTGCCAGGTGATCGCTGATGTACTGACAAGCCTCGCGTACCCGATTATCCATCGGTGGATGGAGCGACTCGTTAATCGCTTCCATGCGCCGCAGTAACAATTGCTCAAGCAGATTTATCGCCAGCAGCTCCGAATAGCGCCCTTCCCCTTGCCCGGCGTTAATGATTTGCCCAAACAGGTCGCTGAAATGCGGCTGGTGCGCTTCATCCGGGCGAAAGAACCCCGTATTGGCAAATATTGACGGCCAGTTAAGCCATTCATGCCAGTAGGCGCGCGGACGAAAGTAAACCCACTGGTGATACCATTCGCGAGCCTCCGGATGACGACCGTAGTGATGAATCTCTCCTGGCGGGAACAGCAAAATATCACCCGGTCGGCAAACAAATTCTCGTCCCTGATTTTTCACCACCCCCTGACCGCGAATGGTGAGATTGAGAATATAACCTTTCATTCCCAGCGGTCGGTCGATAAAAAAATCGAGATAACCGTTGGCCTCAATCGGCGTTAAACCCGCCACCAGATGGGCATTAAACGAGTATCCCGGCAGCAGGGGATCATTTTGCGCTTCAGCCATACTTTTCATACTCCCGCCATTCAGAGAAGAAACCAATTGTCCATATTGCATCAGACATTGCCGTCACTGCGTCTTTTACTGGCTCTTCTCGCTAACCAAACCGGTAACCCCGCTTATTAAAAGCATTCTGTAACAAAGCGGGACCAAAGCCATGACAAAAACGCGTAACAAAAGTGTCTATAATCACGGCAGAAAAGTCCACATTGATTATTTGCACGGCGTCACACTTTGCTATGCCATAGCATTTTTATCCATAAGATTAGCGGATCCTACCTGACGCTTTTTATCGCAACTCTCTACTGTTTCTCCATACCCGTTTTTTTGGGAATTCGAGCTCTAAGGAGGTTATAAAAAATGGATATTAATACTGAAACTGAGATCAAGCAAAAGCATTCACTAACCCCCTTTCCTGTTTTCCTAATCAGCCCGGCATTTCGCGGGCGATATTTTCACAGCTATTTCAGGAGTTCAGCCATGAACGCTTATTACATTCAGGATCGTCTTGAGGCTCAGAGCTGGGCGCGTCACTACCAGCAGCTCGCCCGTGAAGAGAAAGAGGCAGAACTGGCAGACGACATGGAAAAAGGCCTGCCCCAGCACCTGTTTGAATCGCTATGCATCGATCATTTGCAACGCCACGGGGCCAGCAAAAAATCCATTACCCGTGCGTTTGATGACGATGTTGAGTTTCAGGAGCGCATGGCAGAACACATCCGGTACATGGTTGAAACCATTGCTCACCACCAGGTTGATATTGATTCAGAGGTATAAAACGAATGAGTACTGCACTCGCAACGCTGGCTGGGAAGCTGGCTGAACGTGTCGGCATGGATTCTGTCGACCCACAGGAACTGATCACCACTCTTCGCCAGACGGCATTTAAAGGTGATGCCAGCGATGCGCAGTTCATCGCATTACTGATCGTTGCCAACCAGTACGGCCTTAATCCGTGGACGAAAGAAATTTACGCCTTTCCTGATAAGCAGAATGGCATCGTTCCGGTGGTGGGCGTTGATGGCTGGTCCCGCATCATCAATGAAAACCAGCAGTTTGATGGCATGGACTTTGAGCAGGACAATGAATCCTGTACATGCCGGATTTACCGCAAGGACCGTAATCATCCGATCTGCGTTACCGAATGGATGGATGAATGCCGCCGCGAACCATTCAAAACTCGCGAAGGCAGAGAAATCACGGGGCCGTGGCAGTCGCATCCCAAACGGATGTTACGTCATAAAGCCATGATTCAGTGTGCCCGTCTGGCCTTCGGATTTGCTGGTATCTATGACAAGGATGAAGCCGAGCGCATTGTCGAAAATACTGCATACACTGCAGAACGTCAGCCGGAACGCGACATCACTCCGGTTAACGATGAAACCATGCAGGAGATTAACACTCTGCTGATCGCCCTGGATAAAACATGGGATGACGACTTATTGCCGCTCTGTTCCCAGATATTTCGCCGCGACATTCGTGCATCGTCAGAACTGACACAGGCCGAAGCAGTAAAAGCTCTTGGATTCCTGAAACAGAAAGCCGCAGAGCAGAAGGTGGCAGCATGACACCGGACATTATCCTGCAGCGTACCGGGATCGATGTGAGAGCTGTCGAACAGGGGGATGATGCGTGGCACAAATTACGGCTCGGCGTCATCACCGCTTCAGAAGTTCACAACGTGATAGCAAAACCCCGCTCCGGAAAGAAGTGGCCTGACATGAAAATGTCCTACTTCCACACCCTGCTTGCTGAGGTTTGCACCGGTGTGGCTCCGGAAGTTAACGCTAAAGCACTGGCCTGGGGAAAACAGTACGAGAACGACGCCAGAACCCTGTTTGAATTCACTTCCGGCGTGAATGTTACTGAATCCCCGATCATCTATCGCGACGAAAGTATGCGTACCGCCTGCTCTCCCGATGGTTTATGCAGTGACGGCAACGGCCTTGAACTGAAATGCCCGTTTACCTCCCGGGATTTCATGAAGTTCCGGCTCGGTGGTTTCGAGGCCATAAAGTCAGCTTACATGGCCCAGGTGCAGTACAGCATGTGGGTGACGCGAAAAAATGCCTGGTACTTTGCCAACTATGACCCGCGTATGAAGCGTGAAGGCCTGCATTATGTCGTGATTGAGCGGGATGAAAAGTACATGGCGAGTTTTGACGAGATCGTGCCGGAGTTCATCGAAAAAATGGACGAGGCACTGGCTGAAATTGGTTTTGTATTTGGGGAGCAATGGCGATGACGCATCCTCACGATAATATCCGGGTAGGCGCAATCACTTTCGTCTACTCCGTTACAAAGCGAGGCTGGGTATTTCCCGGCCTTTCTGTTATCCGAAATCCACTGAAAGCACAGCGGCTGGCTGAGGAGATAAATAATAAACGAGGGGCTGTATGCACAAAGCATCTTCTGTTGAGTTAAGAACGAGTATCGAGATGGCACATAGCCTTGCTCAAATTGGAATCAGGTTTGTGCCAATACCAGTAGAAACAGACGAAGAATCCATGGGTATGGACAGTTTTCCCTTTGATATGTAACGGTGAACAGTTGTTCTACTTTTGTTTGTTAGTCTTGATGCTTCACTGATAGATACAAGAGCCATAAGAACCTCAGATCCTTCCGTATTTAGCCAGTATGTTCTCTAGTGTGGTTCGTTGTTTTTGCGTGAGCCATGAGAACGAACCATTGAGATCATACTTACTTTGCATGTCACTCAAAAATTTTGCCTCAAAACTGGTGAGCTGAATTTTTGCAGTTAAAGCATCGTGTAGTGTTTTTCTTAGTCCGTTACGTAGGTAGGAATCTGATGTAATGGTTGTTGGTATTTTGTCACCATTCATTTTTATCTGGTTGTTCTCAAGTTCGGTTACGAGATCCATTTGTCTATCTAGTTCAACTTGGAAAATCAACGTATCAGTCGGGCGGCCTCGCTTATCAACCACCAATTTCATATTGCTGTAAGTGTTTAAATCTTTACTTATTGGTTTCAAAACCCATTGGTTAAGCCTTTTAAACTCATGGTAGTTATTTTCAAGCATTAACATGAACTTAAATTCATCAAGGCTAATCTCTATATTTGCCTTGTGAGTTTTCTTTTGTGTTAGTTCTTTTAATAACCACTCATAAATCCTCATAGAGTATTTGTTTTCAAAAGACTTAACATGTTCCAGATTATATTTTATGAATTTTTTTAACTGGAAAAGATAAGGCAATATCTCTTCACTAAAAACTAATTCTAATTTTTCGCTTGAGAACTTGGCATAGTTTGTCCACTGGAAAATCTCAAAGCCTTTAACCAAAGGATTCCTGATTTCCACAGTTCTCGTCATCAGCTCTCTGGTTGCTTTAGCTAATACACCATAAGCATTTTCCCTACTGATGTTCATCATCTGAGCGTATTGGTTATAAGTGAACGATACCGTCCGTTCTTTCCTTGTAGGGTTTTCAATCGTGGGGTTGAGTAGTGCCACACAGCATAAAATTAGCTTGGTTTCATGCTCCGTTAAGTCATAGCGACTAATCGCTAGTTCATTTGCTTTGAAAACAACTAATTCAGACATACATCTCAATTGGTCTAGGTGATTTTAATCACTATACCAATTGAGATGGGCTAGTCAATGATAATTACTAGTCCTTTTCCTTTGAGTTGTGGGTATCTGTAAATTCTGCTAGACCTTTGCTGGAAAACTTGTAAATTCTGCTAGACCCTCTGTAAATTCCGCTAGACCTTTGTGTGTTTTTTTTGTTTATATTCAAGTGGTTATAATTTATAGAATAAAGAAAGAATAAAAAAAGATAAAAAGAATAGATCCCAGCCCTGTGTATAACTCACTACTTTAGTCAGTTCCGCAGTATTACAAAAGGATGTCGCAAACGCTGTTTGCTCCTCTACAAAACAGACCTTAAAACCCTAAAGGCTTAAGTAGCACCCTCGCAAGCTCGGTTGCGGCCGCAATCGGGCAAATCGCTGAATATTCCTTTTGTCTCCGACCATCAGGCACCTGAGTCGCTGTCTTTTTCGTGACATTCAGTTCGCTGCGCTCACGGCTCTGGCAGTGAATGGGGGTAAATGGCACTACAGGCGCCTTTTATGGATTCATGCAAGGAAAC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